يمكن قياس النمو الميكروبي Microbial growth في وسط medium، بطرق مباشرة وغير
مباشرة.
1- الطرق المباشرة Direct Methods
هناك عدد من الطرق لقياس أعداد الخلايا بشكل مباشر. قد يرغب العلماء
في إجراء العد المجهري المباشر direct microscopic count بإستخدام عيّنة معروفه من المزرعة على شريحة
عد counting
chamber مصمّمة خصيصاً. ومع ذلك، سيحسب هذا الإجراء كلا الخلايا الحيّة
والميتة.
في إختبار العدد الأكثر إحتمالا most probable number test، تضاف عينات ميكروبية
إلى العديد من أنابيب مرق اللاكتوز lactose broth tubes ووجود أو غياب الغاز gas المشكّل في التخمر fermentation يعطي تقدير إحصائي
تقريبي لعدد الخلايا. إستخدمت هذه التقنية لقياس جودة الماء water quality.
في إجراء عد الأطباق القياسي standard plate count procedure ،
تنشر عينات من مزرعة المرق broth culture على أطباق الآغار agar plates وتمزج
في الآغار باستخدام طريقة الأطباق المصبوبة pour-plate method. الإفتراض هو أنّ
كلّ خلية ستخضع لجولات متعدّدة من الانقسام الخلوي cell division لتنتج مستعمرات
منفصلة separate
colonies على الطبق. لأن خليتين أو أكثر يمكن أن تتجمع معاً على الطبق
وتنمو كمستعمرة واحدة، يعبر عن عد الأطباق القياسي بعدد وحدات تشكيل المستعمرة colony-forming units (CFUs). بعد الحضانة، سيستخدم عدد وحدات تشكيل المستعمرة
لتقدير عدد الخلايا الحية أصلاً في الطبق.
2- الطرق الغير مباشرة Indirect Methods
تتضمّن الطرق الغير مباشرة قياس الوزن الجاف dry weight لعشائر الخلايا،
الذي يعطي مؤشر على كتلة الخلايا cell mass. يمكن أن يقاس إمتصاص الأكسجين Oxygen في الأيض metabolism أيضا كمؤشر على النشاط
الأيضي metabolic
activity وبالتالي عدد الخلايا.
تستخدم طريقة غير مباشرة أخرى جهاز قياس الطيف الضوئي spectrophotometer لقياس التغيّم cloudiness، أو التعكر turbidity، في مزرعة المرق. يكشف
هذا الجهاز عن كمية الضوء المتناثرة من قبل معلق من الخلايا suspension of cells موضوع
في الجهاز بحيث أن كمية الضوء المبعثرة (الكثافة البصرية optical density، OD) هي وظيفة كتلة الخلية؛ أي أنه، وجود المزيد
من الخلايا، المزيد من الضوء يبعثر أو يمتصّ، مما يؤدي إلى قراءة إمتصاصية أعلى
على جهاز spectrophotometer. يمكن أن ينشأ منحنى
قياسي ليخدم كمقياس لأعداد الخلايا. ومع ذلك، لأن أكثر من 10 مليون خلية ضرورية لعمل
القراءة على جهاز spectrophotometer، التعكر ليست طريقة مفيدة لدراسة نمو أعداد صغيرة
من الخلايا البكتيرية.
ليست هناك تعليقات:
إرسال تعليق